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當(dāng)前位置:
哈獸研步志高所長(zhǎng):非洲豬瘟防控與疫苗研制進(jìn)展
來(lái)源: | 作者:管理員 | 發(fā)布時(shí)間: 2021-06-26 | 1667 次瀏覽 | 分享到:



6月19-20日,由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、中國(guó)獸藥協(xié)會(huì)聯(lián)合舉辦的第八屆中國(guó)獸藥展覽會(huì)在河南鄭州隆重召開(kāi)。本屆展覽會(huì)以貫徹總書(shū)記對(duì)農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新系列講話(huà)精神為主線,以“綠色發(fā)展 合作共贏”為主題,充分展示改革開(kāi)放以來(lái)我國(guó)獸藥行業(yè)取得的輝煌成績(jī)和新時(shí)代獸藥人的精神風(fēng)貌,獻(xiàn)禮中國(guó)共產(chǎn)黨百年誕辰。


展會(huì)舉辦多場(chǎng)次主題鮮明、形式新穎、高水平的報(bào)告會(huì)、學(xué)術(shù)講座、專(zhuān)題論壇。安排了獸藥科研成果信息發(fā)布、成果轉(zhuǎn)讓簽約、新版獸藥GMP相關(guān)設(shè)備產(chǎn)品推介會(huì)等系列活動(dòng),加快推進(jìn)獸藥科技的做大做強(qiáng),助力新版獸藥GMP的順利實(shí)施。在主題報(bào)告會(huì)上,哈爾濱獸醫(yī)研究所步志高所長(zhǎng)應(yīng)邀作《非洲豬瘟防控與疫苗研制進(jìn)展》專(zhuān)題報(bào)告。




步志高所長(zhǎng)首先強(qiáng)調(diào)了非洲豬瘟疫苗研發(fā)的重要性并介紹了非洲豬瘟疫苗的研制進(jìn)展。

01
完成候選的疫苗實(shí)驗(yàn)室研究及中間試制
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2018年10至11月,分離獲得我國(guó)流行非洲豬瘟病毒株,完成了全基因組序列測(cè)定和分析,建立了感染發(fā)病模型;2018年11月至2019年5月,以我國(guó)流行毒株為基礎(chǔ),經(jīng)系統(tǒng)安全性和有效性研究,篩選出1株安全有效的弱毒疫苗HLJ/18-7GD株;2019年6月至2020年2月,初步完成了疫苗實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品質(zhì)量研究、大規(guī)模生產(chǎn)工藝研究及中間試制、生物安全評(píng)價(jià)中間試驗(yàn)。

02
安全評(píng)價(jià)完成環(huán)境釋放和第一階段臨床實(shí)驗(yàn)
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2020年3月24日始,先后在黑龍江、河南和新疆的4個(gè)獨(dú)立豬場(chǎng)開(kāi)展生物安全評(píng)價(jià)環(huán)境釋放試驗(yàn)和第一階段臨床試驗(yàn),包括育肥豬3077頭、能繁母豬28頭和家雜野豬25頭。

03
完成安全評(píng)價(jià)生產(chǎn)性試驗(yàn)和第二階段臨床試驗(yàn)
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2020年10日3日起,先后在黑龍江、河北和湖北5個(gè)試驗(yàn)豬場(chǎng)開(kāi)展安全評(píng)價(jià)生產(chǎn)性試驗(yàn)和第二階段臨床試驗(yàn),育肥豬11410頭、母豬201頭。黑龍江肇州、湖北武昌、河北巨鹿和黑龍江雙城四個(gè)基地育肥豬試驗(yàn)已順利完成,有關(guān)樣品檢測(cè)、數(shù)據(jù)分析、總結(jié)報(bào)告等有序推進(jìn)中。母豬安全評(píng)價(jià)生產(chǎn)性試驗(yàn)已完成第一胎,第二胎試驗(yàn)有序進(jìn)行之中。


步志高所長(zhǎng)表示,當(dāng)前非洲豬瘟疫苗研發(fā)主要面臨以下挑戰(zhàn):

非洲豬瘟病毒結(jié)構(gòu)龐大復(fù)雜,基因組超過(guò)180Kb,約編碼150余個(gè)潛在基因;

滅活或亞單位疫苗難以誘導(dǎo)中和抗體,難以提供有效保護(hù),弱毒疫苗理論上更具可行性;

病毒只感染并致死豬和野豬,體外只能在豬原代巨噬細(xì)胞增殖,難以通過(guò)傳代致弱途徑獲得安全有效弱毒疫苗;

通過(guò)精準(zhǔn)刪除毒力和免疫抑制基因,獲得安全有效弱毒疫苗是目前相對(duì)可行的技術(shù)路線。

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非洲豬瘟弱毒疫苗構(gòu)建策略


步志高所長(zhǎng)介紹了非洲豬瘟弱毒疫苗構(gòu)建策略和1種7基因聯(lián)合缺失方案成功構(gòu)建候選弱毒疫苗,經(jīng)研究,該疫苗不致死不致病SPF豬,遺傳穩(wěn)定,體內(nèi)連續(xù)傳代不返強(qiáng),免疫豬對(duì)強(qiáng)毒致死攻擊提供有效保護(hù)。


研究調(diào)查發(fā)現(xiàn),非洲豬瘟基因II型低致死自然突變株臨床癥狀表現(xiàn)為關(guān)節(jié)腫脹、癱瘓、皮膚腫塊、皮膚壞死。較低劑量不致死,較高劑量40-60%。國(guó)內(nèi)自然變異株為CD2v編碼核苷酸突變或缺失HAD表型喪失。


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HLJ/18-7GD免疫有效阻斷低致死自然變異株水平傳播


弱毒疫苗實(shí)驗(yàn)室研究和產(chǎn)品中間試劑

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第一階段田間試驗(yàn)包括育肥豬、母豬及野豬安全評(píng)價(jià)環(huán)境釋放試驗(yàn)和針對(duì)商品育肥豬的安全性、有效性臨床試驗(yàn)。

2020年3月23日農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)在3省區(qū)開(kāi)展第一階段臨床試驗(yàn)。黑龍江、河南和新疆三個(gè)封閉基地開(kāi)展首期臨床試驗(yàn),先后入組2962頭育肥仔豬,分別于4月6日、5月10日和6月8日啟動(dòng)免疫。大慶肇州31-37日齡育肥豬1060頭,4月6日首免;洛陽(yáng)孟津39-47日齡育肥豬562頭,5月10日首免;石河子150團(tuán)37-43日齡育肥豬1340頭,6月8日首免。商品育肥豬3000余頭,能繁母豬28頭及其分娩仔豬家雜野豬25頭均嚴(yán)格生物安全隔離,不得銷(xiāo)售或利用,全部無(wú)害化處理。


第二階段田間試驗(yàn)是育肥豬、母豬生物安全生產(chǎn)性試驗(yàn)和商品豬的安全性、有效性臨床試驗(yàn)。

2020年8月20日農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)進(jìn)入生物安全評(píng)價(jià)生產(chǎn)性試驗(yàn)階段。黑龍江省兩個(gè)封閉試驗(yàn)基地先后入組3400頭育肥仔豬及201頭懷孕母豬,自10月3日起先后注苗,開(kāi)展田間環(huán)境下的生物安全生產(chǎn)性試驗(yàn)。黑龍江省肇州市及牡丹江市生物安全生產(chǎn)性試驗(yàn)10月3日首免。

2020年9月18日農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)在3省區(qū)開(kāi)展第二階段臨床試驗(yàn)黑龍江、河北和湖北等四個(gè)臨床試驗(yàn)封閉基地開(kāi)展第二階段臨床試驗(yàn),先后入組7900、2020和1970頭育肥仔豬,分別于10月4日、10月18日和10月18日啟動(dòng)免疫。大慶肇州和雙城31~37日齡育肥豬7900頭,10月4日首免(哈獸研ABSL-3攻毒評(píng)價(jià));河北巨鹿基地37~43日齡育肥豬2020頭,10月18日首免(中國(guó)ACDC ABSL-3攻毒評(píng)價(jià));河北武漢基地39~47日齡育肥豬1970頭,10月18日首免。商品育肥豬3000頭能繁母豬200頭及其生產(chǎn)仔豬均嚴(yán)格生物安全隔離,不得銷(xiāo)售或利用,全部無(wú)害化處理。


結(jié)果表明第一階段臨床試驗(yàn)攻毒保護(hù)效力:

單劑量(5.0lg)一次接種,2個(gè)月后攻毒存活保護(hù)50%左右;

單劑量(5.0lg)兩次接種,2個(gè)月后攻毒存活保護(hù)80%以上;

10倍劑量(6.0lg)一次接種,2個(gè)月后攻毒存活保護(hù)80%以上。


核酸檢測(cè)qPCR方法調(diào)整

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步志高所長(zhǎng)表示對(duì)非洲豬瘟病毒核酸檢測(cè)方法需要進(jìn)行調(diào)整,目前所有樣品編盲,重復(fù)采集三份,GCP中心檢測(cè)、留樣各一份,中檢所平行檢測(cè)一份。步志高所長(zhǎng)指出目前需要圍繞新劑量標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)充質(zhì)量研究資料尤其是對(duì)其安全性和有效性


目前實(shí)驗(yàn)表明疫苗對(duì)商品育肥豬具有良好的安全性。

團(tuán)隊(duì)先后在五省區(qū)的8個(gè)豬場(chǎng)開(kāi)展共14487頭商品育肥豬的田間試驗(yàn),分別觀測(cè)132天至184天。并對(duì)田間試驗(yàn)100萬(wàn)余豬次臨床觀察記錄、910頭豬2.5萬(wàn)余次體溫記錄和2100頭豬剖檢觀察記錄的數(shù)據(jù)分析表明:疫苗接種對(duì)育肥豬生長(zhǎng)無(wú)顯著影響,未觀察到因疫苗接種引起的明顯臨床異常及病理?yè)p傷。


在第一階段育肥豬臨床試驗(yàn)中,疫苗接種豬及其同居豬平均死淘率為2.6%,對(duì)照組豬平均為1.8%。

第二階段育肥豬臨床試驗(yàn)中,疫苗接種豬及其同居豬平均死淘率為13.4%,對(duì)照豬為14。1%。

結(jié)果表明:疫苗接種豬和同居豬的死淘率與對(duì)照豬無(wú)顯著差異。


試驗(yàn)豬群的豬藍(lán)耳病病毒(PRRSV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)的混合感染普遍,繼發(fā)細(xì)菌性疾病情況復(fù)雜。臨床試驗(yàn)豬群的總體死淘率與相同來(lái)源仔豬、相似養(yǎng)殖環(huán)境場(chǎng)豬群的平均水平相當(dāng)。疫苗接種組和同居組與對(duì)照組無(wú)顯著性差異,表明疫苗接種對(duì)豬群死淘率無(wú)影響。


隨機(jī)選取850頭育肥豬定期稱(chēng)重監(jiān)測(cè)疫苗接種后體重增長(zhǎng)情況。疫苗接種后4個(gè)月,免疫豬、同居豬和對(duì)照豬平均體重分別為111.0±10.9kg、113.3±9.7kg和109.9±11.2kg,平均日增重分別為0.81±0.10kg、0.83±0.08kg和0.80±0.10kg。免疫接種豬、同居組豬及對(duì)照豬之間無(wú)顯著性差異,表明疫苗接種對(duì)育肥豬生產(chǎn)性能無(wú)影響。


按照試驗(yàn)方案,疫苗接種后至出欄前,定期采集試驗(yàn)豬抗凝血液、口肛拭子及剖檢組織樣品60000余份,檢測(cè)疫苗毒核酸。疫苗接種后在育肥豬體內(nèi)呈低水平復(fù)制可在部分免疫豬口肛拭子中檢測(cè)到疫苗病毒核酸,主要在接種后5周內(nèi),無(wú)持續(xù)排毒。


田間試驗(yàn)中,疫苗以0.1-10倍劑量共接種11880頭商品育肥豬,接種后分別觀測(cè)132天至184天不等,未觀察或檢測(cè)到疫苗毒株毒力返強(qiáng)。疫苗接種后定期采集血清樣品7500余份,檢測(cè)非洲豬瘟及其他5種重要豬病原共8種特異抗體。


疫苗接種后第1、2和3個(gè)月,非洲豬瘟疫苗特異抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率分別為69.1%(661/957)、80.6%(684/849)和93.0%(824/886)。單劑量和10倍劑量同居豬(與疫苗接種豬同圈混養(yǎng)的未接種豬)同居飼養(yǎng)1、2和3個(gè)月抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)率分別為0%(0/204)、1.2%(2/172)和4.4%(8/180)。


疫苗接種豬同舍飼養(yǎng)的未接種疫苗對(duì)照豬以上3個(gè)時(shí)間點(diǎn)均未檢測(cè)到抗體轉(zhuǎn)陽(yáng)(0/429) 。結(jié)果表明,疫苗傳播能力低,無(wú)連續(xù)水平傳播能力。非洲豬瘟弱毒疫苗接種對(duì)豬瘟、豬藍(lán)耳病、口蹄疫、偽狂犬和圓環(huán)病毒等其它常規(guī)疫苗接種免疫效果無(wú)干擾。


免疫育肥豬對(duì)強(qiáng)毒致死攻擊提供有效保護(hù)。


田間試驗(yàn)期間,免疫接種育肥豬先后8次分別轉(zhuǎn)運(yùn)至哈獸研和中國(guó)動(dòng)物CDC的生物安全實(shí)驗(yàn)室,采用非洲豬瘟強(qiáng)毒致死攻擊保護(hù)試驗(yàn)。結(jié)果,存活保護(hù)率82.6%至100%,平均89.3%(143/160);單劑量—次接種保護(hù)持續(xù)期2個(gè)月以上。


步志高所長(zhǎng)表示弱毒苗對(duì)母豬及生產(chǎn)仔豬健康和生產(chǎn)性能無(wú)影響。


團(tuán)隊(duì)先后在黑龍江北安市和牡丹江市的2個(gè)豬場(chǎng)開(kāi)展能繁母豬農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)環(huán)境釋放試驗(yàn)和生產(chǎn)性試驗(yàn),分別設(shè)單劑量接種組、10倍劑最接種組及未接種對(duì)照組。疫苗接種后,環(huán)境釋放試驗(yàn)28頭母豬觀察了183天,生產(chǎn)性試驗(yàn)201頭母豬已觀察217天。苗接種母豬后未觀察到慢性或急性臨床不良反應(yīng),生長(zhǎng)狀況良好,發(fā)情與受孕及胚胎發(fā)育正常


疫苗接種母豬流產(chǎn)率為1.23%,單胎平均產(chǎn)仔數(shù)及健仔率分別為11.587.3%;對(duì)照母豬的流產(chǎn)率為2.56%;單胎平均產(chǎn)仔數(shù)及健仔率分別為11.6及87.6%;疫苗接種組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異,與提供試驗(yàn)?zāi)肛i場(chǎng)同期的另外5O4頭母豬相當(dāng)。目前生產(chǎn)性試驗(yàn)?zāi)肛i免疫后第二胎試驗(yàn)仍在繼續(xù)進(jìn)行中。


生產(chǎn)性試驗(yàn)中,隨機(jī)選取測(cè)定901頭仔豬出生重,760頭仔豬斷奶重。疫苗免疫組母豬產(chǎn)仔豬與對(duì)照組母豬產(chǎn)仔豬相比均無(wú)顯著性差異。


生產(chǎn)性試驗(yàn)中,隨機(jī)選取單劑量接種母豬18胎和10倍劑量母豬7胎的新生仔豬,每胎隨機(jī)選取3頭剖檢,檢測(cè)血液和組織中疫苗毒核酸。結(jié)果陽(yáng)性仔豬比例單劑量母豬組為11.1%(6/54),10倍劑量組母豬組為19.0%(4/21),陽(yáng)性仔豬主要來(lái)自妊娠中后期接種母豬。


進(jìn)一步對(duì)新生仔豬血液、口肛拭子和臟器樣品等進(jìn)行跟蹤監(jiān)測(cè),結(jié)果表明,疫苗毒在仔豬出生后2個(gè)月內(nèi)均被機(jī)體有效清除。


環(huán)境釋放試驗(yàn)?zāi)肛i分娩仔豬隨機(jī)選取30頭觀察至142日齡。生產(chǎn)性試驗(yàn)?zāi)肛i分娩仔豬23窩共219頭已觀察至127日齡。臨床表現(xiàn),統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示死淘率、增重等指標(biāo)均無(wú)異常。疫苗接種對(duì)繁殖母豬發(fā)情、受孕、妊娠無(wú)影響;對(duì)母豬產(chǎn)仔數(shù)、健仔率及仔豬出生重、斷奶重等生產(chǎn)指標(biāo)無(wú)影響。


初步可得出如下結(jié)論:

1. 通過(guò)實(shí)驗(yàn)室1100余頭SPF豬安全性和有效性實(shí)驗(yàn)研究,以及田間14487頭商品育肥豬和229頭能繁母豬試驗(yàn),已有的數(shù)據(jù)表明,非洲豬瘟弱毒疫苗(HLJ/18-7GD株)遺傳穩(wěn)定,接種后不致病、不返強(qiáng),對(duì)育肥豬生長(zhǎng)發(fā)育、增重和死淘等無(wú)不良影響;對(duì)田間商品豬存活保護(hù)率80%以上。

2. 對(duì)接種母豬繁殖性能無(wú)明顯影響,對(duì)分娩仔豬健康狀況及生產(chǎn)性能無(wú)明顯異常。鑒于繁殖母豬生產(chǎn)利用周期長(zhǎng)達(dá)3-5年,疫苗接種的持續(xù)影響有待進(jìn)一步觀測(cè)。

3. 大規(guī)模生產(chǎn)工藝可行,質(zhì)量可控,成本經(jīng)濟(jì),已具備生產(chǎn)應(yīng)用條件。

步志高所長(zhǎng)提到,哈獸研全資下屬維科生物技術(shù)公司的建成非洲豬瘟疫苗生產(chǎn)線,2020年9月30日通過(guò)獸藥GMP靜態(tài)驗(yàn)收。按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部部署要求,依據(jù)疫苗制造及檢驗(yàn)試行規(guī)程,順利完成94萬(wàn)瓶,3000余萬(wàn)頭份的生產(chǎn)儲(chǔ)備。


步志高所長(zhǎng)在會(huì)議中建議疫苗限用于全進(jìn)全出商品育肥豬。暫不用于繁殖用的母豬及種公豬。

最后步志高所長(zhǎng)在會(huì)議中表示要實(shí)現(xiàn)的既定目標(biāo):

安全性達(dá)到活苗應(yīng)有標(biāo)準(zhǔn)

能有效提供強(qiáng)毒攻擊保護(hù)

大規(guī)模生產(chǎn)工藝高效可行

公共產(chǎn)品具有成本經(jīng)濟(jì)性

步志高所長(zhǎng)強(qiáng)調(diào),要高度重視、積極推進(jìn)非洲豬瘟疫苗研發(fā)工作,堅(jiān)持尊重科學(xué)規(guī)律,堅(jiān)持時(shí)間服從質(zhì)量,嚴(yán)格按照程序開(kāi)展研發(fā)工作,確保疫苗的安全性、有效性,確保經(jīng)得起科學(xué)和實(shí)踐檢驗(yàn),為生豬產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展作出貢獻(xiàn)。

堅(jiān)持科學(xué),只爭(zhēng)朝夕。

要充分認(rèn)識(shí)疫苗研發(fā)對(duì)我國(guó)生豬生產(chǎn)的重要性,按照時(shí)間服從質(zhì)量、穩(wěn)妥有序推進(jìn)的要求開(kāi)展研發(fā)工作,力爭(zhēng)早日投入生產(chǎn)應(yīng)用。

有任何問(wèn)題 請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系,18937105196


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