丁酸梭菌是一種厭氧的革蘭氏陽性芽孢桿菌,呈直桿狀或稍有彎曲,單個(gè)或成對(duì),短鏈,偶見有絲狀菌體,菌體灰白色,呈煎蛋樣,中間隆起。兩端鈍圓,中間部分輕度膨脹,周身鞭毛,具有運(yùn)動(dòng)性。孢子卵圓,偏心或次端生。革蘭染色初培養(yǎng)的菌為陽性,后期培養(yǎng)可變?yōu)楦锾m陰性。
丁酸梭菌是畜禽養(yǎng)殖業(yè)中重要的益生菌,具有顯著的抗炎、調(diào)節(jié)腸道菌群、增強(qiáng)免疫力等生物學(xué)功能,還可促進(jìn)機(jī)體短鏈脂肪酸、乳酸和消化酶等物質(zhì)生成,并且通過調(diào)節(jié)腸道菌群、促進(jìn)免疫防御因子分泌來改善畜禽健康。丁酸梭菌的主要代謝產(chǎn)物之一為丁酸,而丁酸是腸道上皮組織細(xì)胞再生和修復(fù)的主要營養(yǎng)物質(zhì),丁酸在促進(jìn)動(dòng)物生長方面作用顯著。
丁酸梭菌的代謝途徑
丁酸梭菌以葡萄糖為底物的發(fā)酵過程中,通過糖酵解途徑生成 3-磷酸甘油醛,再生成丙酮酸,丙酮酸在鐵蛋白氧化還原酶的作用下生成乙酰輔酶 A,生成乙酰輔酶 A 后,丁酸梭菌會(huì)根據(jù)自己生長需求的不同代謝產(chǎn)生不同產(chǎn)物,一種是生成丁酸,一種是生成乙酸[1]。
丁酸生成途徑: 乙酰輔酶 A 在硫化酶催化下生成乙酰乙酰輔酶 A ( acetoacetyl-CoA ) ,然后在多種酶( β-羥基丁酰輔酶 A 脫氫酶、巴豆酸酶、丁酰輔酶 A 脫氫酶 ) 催化下生成丁酰輔酶 A,丁酰輔酶 A 是丁酸的重要前 體 物 質(zhì)。丁酰輔酶A由磷酸丁酰轉(zhuǎn)移酶( phosphotransbutyrylase,PTB ) 催化形成丁酰磷酸( butyryl-P) ,在丁酸激酶( butyrate kinase,BK) 催化下生成主產(chǎn)物丁酸。
乙酸生成途徑: 乙酰輔酶 A 由磷酸乙酰轉(zhuǎn)移酶(phosphoransacetylase,PTA) 催化生成乙酰磷酸(acetylP) ,由乙酰激酶( acetate kinase,AK) 催化下一步反應(yīng)生成乙酸。
丁酸梭菌的胞外代謝物中含有許多活性物質(zhì),含量較多的有機(jī)酸類、氨基酸類和核苷類物質(zhì)等?,F(xiàn)有文獻(xiàn)已表明它們在防病、抗菌、食品添加劑等方面均有一定的應(yīng)用價(jià)值[2-3]。
對(duì)腸道有益菌的體外增殖作用
對(duì)畜禽腸道主要有害菌的抑制作用
趙熙等(1999)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),給小鼠灌服含有丁酸梭菌活菌的微生態(tài)制劑后, 小鼠腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳桿菌的數(shù)量顯著增加[10]。張達(dá)榮等(1999)研究發(fā)現(xiàn), 經(jīng)丁酸梭菌治療的腸易激綜合征患者糞便菌群中的雙歧桿菌、無芽孢厭氧桿菌、大腸菌和乳酸菌等與健康動(dòng)物無顯著差異,占腸道菌群中主要比例的雙歧桿菌、乳酸桿菌顯著上升,而具有潛在致病性的丁酸梭菌顯著下降[11]。朱曉慧等(2004)向雙歧桿菌、嗜酸乳桿菌和糞鏈球菌的培養(yǎng)基中加入1/3 比例的丁酸梭菌發(fā)酵提取物,室溫培養(yǎng)24h,結(jié)果發(fā)現(xiàn),3種菌的活菌含量分別比對(duì)照組提高 24.00 %、42.57 %和 6.76 %,表明丁酸梭菌對(duì)腸道有益菌具有增殖作用[12]。
致病大腸桿菌、沙門氏菌是畜禽腸道常見致病菌,感染畜禽出現(xiàn)腹瀉、下痢等癥狀。謝樹貴等(2007)研究發(fā)現(xiàn),丁酸梭菌 B1株對(duì)豬大腸桿菌 K88、K99、0139株、豬腸炎沙門氏菌和金黃色葡萄球菌5種腸道致病菌有較強(qiáng)的拮抗作用,且在0- 24 h 對(duì)前 4 種菌抑制效果均不顯著,但對(duì)金黃色葡萄球菌 0- 48 h 均有較強(qiáng)的抑制效果[4]。陸儉等(2000)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),丁酸梭菌在試管內(nèi)對(duì)霍亂弧菌具有明顯的拮抗作用[5]。此外,張雪平等(2001)研究表明,丁酸梭菌和嬰兒型雙歧桿菌在體外混合培養(yǎng)能顯著抑制大腸埃希菌 O157∶H7、傷寒桿菌H034、痢疾桿菌 F2a 3 種腸道致病菌的生長繁殖[6]。唐寶英等(2005)將丁酸梭菌與3 種動(dòng)物腸道致病菌(豬大腸桿菌C83902、 雞大腸桿菌 C83851 和雞白痢沙門氏菌Sg9)在體外混合培養(yǎng)試驗(yàn)[7]。結(jié)果發(fā)現(xiàn),一定菌數(shù)比例范圍內(nèi)丁酸梭菌對(duì) 3種致病菌均有顯著的拮抗作用, 且丁酸梭菌對(duì)豬大腸桿菌和雞大腸桿菌的最佳抑制濃度比例均為 10∶1- 100∶1, 對(duì)雞白痢沙門氏菌最佳抑制濃度比例為 5∶1 -10∶1。
大多數(shù)研究者認(rèn)為丁酸梭菌的主要代謝產(chǎn)物為丁酸、乙酸,這些有機(jī)酸的產(chǎn)生有效的抑制了各種腸道致病菌的生長、定植,主要原因是有機(jī)酸的產(chǎn)生加速了培養(yǎng)基 pH 的降低, 不利于病原菌的生長(呂存女等,2001)[8]。但也有試驗(yàn)結(jié)果表明,即使在中性條件下,丁酸梭菌也可以起到抑菌作用,因此有專家推測丁酸梭菌可能還產(chǎn)生某種未知的抑菌因子,可以抑制有害菌的生長,這種抑菌因子很有可能與Clarke 等(1976)從丁酸梭狀芽孢桿菌 NCIB7423 中分離純化的細(xì)菌素為同一物質(zhì)[9]。
丁酸梭菌做為“替抗”主力用于飼料添加劑,可提高動(dòng)物抵抗力,應(yīng)用潛力很大。利用代謝組學(xué)可初步探究其活性代謝產(chǎn)物,有助于分析代謝物與其生物學(xué)功能之間的潛在關(guān)系。丁酸梭菌在體外對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌均有明顯的抑制作用,而對(duì)乳酸桿菌和雙歧桿菌兩種腸道有益菌的生長具有一定的促進(jìn)作用。
參考文獻(xiàn) [1]Lee J,Jang Y S,Han M J,et al. Deciphering Clostridiumtyrobutyricum metabolism based on the whole-genome sequenceand proteome analyses. mBio,2016,7( 3) : e00743-e00716. [2]劉瑾, 張朝正, 趙華。丁酸的生產(chǎn)應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 中國調(diào)味品,2022, 47(8): 197-200. [3] TASAKI O, HIRAIDE A, SHIOZAKI T, et al. The dimer and trimer of 3-hydroxybutyrate oligomer as a precursor of ketone bodies for nutritional care[J]. JPEN Journal of Parenteral and Enteral Nutrition,1999, 23(6): 321-325. [4]謝樹貴,戴青,趙述淼,等。丁酸梭菌對(duì)動(dòng)物致病菌的拮抗作用研究[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,46(3):424-426,435. [5]陸儉,張雪平,孟筱琦,等。酪酸菌和嬰兒型雙歧桿菌對(duì)霍亂弧菌的拮抗試驗(yàn)[J].微生物學(xué)通報(bào),2000,27(5):338-341. [6]張雪平,陸儉,傅思武,等。酪酸菌與雙歧桿菌對(duì)腸道致病菌的體外生物拮抗作用[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2001,13(5):260- 262. [7]唐寶英,朱曉慧,劉佳。酪酸菌對(duì)動(dòng)物腸道致病菌體外拮抗作用的研究[J].生物技術(shù),2005,15(1):37-39. [8]呂存女,鄺欣,張雪平,等。酪酸菌與嬰兒雙歧桿菌對(duì)艱難梭菌體外生物拮抗作用的研究[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,2001,13(4):222-225. [9]Clarke D J,Morris J G.Butyricin 7423:a bacteriocin produced by Clostridium butyricum NCIB 7423[J].J Gen Microbiol,1976,95(1):67- 77. [10]趙熙,冉陸,楊寶蘭,等。丁酸梭菌活菌制劑對(duì)腸道菌群影響的研究[J].中國微生態(tài)雜志,1999,11(6):332-333,338. [11]張達(dá)榮,董曉旭,包幼甫。腸易激綜合癥患者服用酪酸菌制劑前后腸道菌群狀況[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志,1999,11(3):164-166. [12]朱曉慧,唐寶英,劉佳。酪酸菌對(duì)腸道有益菌的增殖作用和共生關(guān)系研究[J]。中國微生態(tài)學(xué)雜志,2004,16(4):193-196.